L'addition d'anticorps spécifiques à une suspension d'éléments
figurés portant les antigènes correspondants provoque l'agglutination
des éléments figurés. Il est ainsi possible de détecter
la présence d'anticorps déterminés dans un sérum
quand on dispose des antigènes correspondants ou, inversement, d'identifier
un antigène avec des sérums-tests adéquats.
La réaction d'hémagglutination est destinée à
montrer le pouvoir agglutinant d'un immunsérum sur des hématies
de mouton, phénomène caractéristique de la réaction
entre des antigènes portés par des cellules et les anticorps
spécifiques correspondants.
Les anticorps sont obtenus par injection de globules rouges de mouton
(GRM) à un lapin dont le système immunitaire produit alors
des anticorps anti-GRM que l'on retrouve dans le sérum où
il est également possible de les caractériser par électrophorèse.
Les produits nécessaires pour réaliser ce type de réaction
sont disponibles dans le commerce, soit séparément,
soit sous forme de kit.
La réaction d'agglutination est aisément mise en évidence
en ajoutant à des globules rouges de mouton (GRM) placés
sur une lame porte-objet des anticorps de lapin anti-GRM. La liaison des
anticorps aux GRM donne lieu à la formation de complexes immuns
insolubles se présentant comme des agrégats visibles à
l’œil nu en raison de l'existence de plusieurs sites de fixation de l'antigène
sur chaque molécule d'immunoglobuline. En effet, les anticorps obtenus
lors de l'immunisation du lapin sont principalement des IgM qui possèdent
un fort pouvoir agglutinant. Ceci résulte de leur structure moléculaire
: chaque molécule d'IgM est constituée de cinq sous-unités
identiques ayant la structure de base des molécules d'anticorps.
In vivo, la réaction antigène-anticorps active
le système du complément ce qui aboutit à la lyse
des globules rouges. Pour observer l'hémagglutination sur lame,
on utilise donc un sérum qui a été décomplémenté
par un traitement thermique (passage à 56°C qui dénature
certaines protéines du complément). Dans ces conditions,
l'hémagglutination ne conduit pas à la lyse des GRM et le
résultat est visible à l’œil nu ou au microscope sur une
lame de verre.
C'est le même principe qui est mis en œuvre dans la détermination
des groupes sanguins des systèmes ABO et rhésus où
l'on utilise des anticorps monoclonaux anti-A, anti-B et anti-Rh pour détecter
la présence des marqueurs correspondants sur les globules rouges.
C'est également le même principe qui est mis en œuvre dans
le sérodiagnostic de différentes maladies infectieuses (syphilis,
typhoïde, brucellose) et dans certains tests de grossesse.
Protocole
Déposer deux fois 20 µL de suspension de GRM à 10 %
sur des lames de microscope puis 20 µL d'immunsérum de lapin
en face de la première et 20 µL de sérum de lapin non
immunisé en face de la seconde.
Si on ne dispose pas de pipette de précision, déposer
une goutte de chaque solution avec une pipette Pasteur ou une seringue
jetable.
Agiter quelques instants par rotation de la lame.
Dépôt des
réactifs
Résultats
Résultat positif
Résultat négatif
L'agglutination des globules rouges ne se produit qu'avec
le sérum provenant d'un animal immunisé contre les GRM montrant
ainsi la présence d'anticorps spécifiques anti-GRM.
Kit comportant l'ensemble des produits nécessaires :
SORDALAB ZA DES POUPETTES
91580 VILLENEUVE SUR AUVERS
Téléphone : 01 69 92 26 72
Fax : 01 69 92 26 74
