Électrophorèse de protéines sur gel d’agarose supporté : protocole général L'électrophorèse est une technique biochimique de séparation fondée sur le fait que des molécules portant des charges électriques différentes migrent à des vitesses différentes lorsqu'elles sont placées dans un champ électrique. Si l’idée d’utiliser cette caractéristique pour séparer des molécules remonte à la fin du dix-neuvième siècle, c'est le biochimiste suédois Arne Tiselius (1902-1971), prix Nobel de chimie en 1948, qui réussit le premier à séparer par cette technique les protéines contenues dans des liquides biologiques complexes comme le sérum sanguin et le lait. Aujourd’hui, l’électrophorèse est devenue une technique de routine dans les laboratoires où on l’utilise pour séparer notamment les protéines et les acides nucléiques. L’électrophorèse des protéines peut être réalisée sur des supports variés, notamment sur gel de polyacrylamide ou sur gel d’agarose selon les informations recherchées. L’électrophorèse de protéines sur gel d’agarose est la technique la plus aisée et la moins coûteuse à mettre en œuvre dans un établissement d’enseignement avec un matériel limité. Elle nécessite simplement une cuve à électrophorèse et une alimentation continue. On peut utiliser une cuve pour électrophorèse clinique dont le coût est modéré ou une cuve pour minigel comme celles utilisées pour l’électrophorèse de l’ADN. Si on ne dispose pas d’une alimentation pour électrophorèse, on peut utiliser à la place une alimentation continue basse tension ou un ensemble de piles en série. Il faut noter que, dans ce cas, il sera nécessaire de laisser les protéines migrer pendant plus longtemps pour obtenir les mêmes résultats (ainsi, avec une tension continue de 12 V, il faut environ une douzaine d’heures de migration quand il ne faut qu’une heure à 120 V). Dans l’enseignement, outre la compréhension de ses aspects techniques et de ses applications, l’électrophorèse se révèle un outil extrêmement utile. Ainsi, l'identification des protéines de divers échantillons naturels (extraits cellulaires, sérums, blanc d’œuf, lait, etc.) ou réalisés artificiellement dans un but pédagogique permet de concrétiser des notions abstraites dans des domaines aussi variés que le métabolisme, l’immunologie ou l’évolution. Divers supports d'électrophorèse peuvent être utilisés, comme les gels d'agarose supportés, les bandes d'acétate de cellulose ou les gels d'agarose coulés par l'utilisateur. On trouvera dans cette page le protocole d'électrophorèse adapté aux gels supportés du commerce, prêts à l'emploi et divers exemples d'applications pédagogiques sont présentés dans les pages des résultats. On trouvera en outre un exemple d'électrophorèse sur bande d'acétate de cellulose (séparation des hémoglobines A et S). Les gels prêts à l'emploi présentent l'avantage d'être coulés sur un support plastique ce qui, d'une part, évite de les préparer et facilite leur manipulation et, d'autre part, permet de conserver indéfiniment les résultats après coloration et séchage. Ils sont fournis en outre avec les produits nécessaires pour préparer le tampon et le colorant. L'inconvénient est qu'ils reviennent plus cher que les gels coulés par l'utilisateur. Comme pour les autres méthodes d'électrophorèse, il faut disposer d'une cuve dans laquelle est placé le gel et d'une alimentation continue. On peut utiliser une minicuve identique à celle utilisée pour l'électrophorèse de l'ADN ou une cuve pour électrophorèse clinique, meilleur marché. Dans le premier cas, la cuve étant conçue pour un gel immergé, on remplit les deux réservoirs avec le tampon d'électrophorèse et on établit le contact électrique entre gel et tampon par des ponts de papier filtre trempés dans le tampon. Il en est de même si l'on utilise une cuve pour électrophorèse clinique car ce type de cuve est conçu initialement pour des bandes d'acétate de cellulose suffisamment souples pour que les extrémités plongent dans les réservoirs de tampon alors que les gels supportés sont coulés sur un support rigide.
Cuves à électrophorèse et alimentations PIERRON 2, rue Gutenberg BP 80609 57206 Sarreguemines Gels supportés prêts à l'emploi BIOMIDI Parc de la Plaine, 35 avenue Marcel Dassault 31500 TOULOUSE - FRANCE 05 61 34 07 14
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