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Culture de cellules animales à partir d'embryon de caille

Suzanne Garaix, Lycée International de Lyon

Sommaire

  1. Référence
  2. Matériel.
  3. Protocole expérimental
  4. Résultats au bout de 7 jours
  5. Remarques
  6. Coût
  7. Illustrations

But cognitif :

But méthodologique :

Résultats attendus :

I- Référence

Publication : "Fenêtre sur … les cultures cellulaires animales"

Auteur : Marie-Jeanne Pellerin

CRDP Ile de France, Académie de Créteil, 20 rue Danielle Casanova, 94170 Le Perreux sur Marne

Application : stage de formation à Lyon, Lycée La Martinière, dirigé par M. Grousset, 1997.

II- Matériel

Par groupe de 4 élèves :

III- Protocole expérimental

1ère semaine : présentation de tout le protocole et de tout le matériel.

Explications (~ 45 min)
Présentation et explications terminées, les élèves se partagent la réalisation du protocole ; 1 des 4 élèves veillera à sa bonne exécution.
Il serait impossible, en une séance de TP, de donner toutes les explications et de réaliser le protocole, d'autant qu'il n'est pas certain que le premier œuf ouvert soit embryonné.

2ème semaine : réalisation du protocole

œufs à l'étuve à 37°C depuis 4 jours, coupelle d'eau dans l'étuve.

  1. Les élèves entrent par la porte du fond de la salle, déposent leurs vêtements au fond de la salle, se lavent les mains au savon puis à l'alcool, se placent devant les paillasses qui ont été javellisées et à côté des becs Bunsen éclairés depuis 40 minutes. Aucun courant d'air, fenêtres fermées.
  2. Passer l'œuf à l'alcool à l'aide d'un coton
  3. Découper une fenêtre au sommet de la coquille à l'aide des ciseaux.
  4. verser le contenu de l'œuf dans un récipient stérile contenant du Tyrode stérile.
  5. repérer l'embryon et découper l'aire extraembryonnaire à l'aide de ciseaux.
  6. transférer l'embryon dans un petit récipient stérile rempli de Tyrode à l'aide de la petite cuillère, éliminer le jaune résiduel en agitant.
  7. transférer l'embryon dans la boîte de Pétri paraffinée à fond noir, remplie de milieu de Tyrode.
  8. épingler l'aire extraembryonnaire en inclinant les épingles.
  9. observer l'embryon à la loupe binoculaire.
  10. dégager l'embryon de ses enveloppes à l'aide des microscalpels.
  11. prélever très doucement l'embryon à l'aide d'une pipette Pasteur et l'installer dans un tube à centrifuger contenant 1 ml de trypsine EDTA additionnée de 1% d'antibiotiques.
  12. placer le tube contenant l'embryon à l'étuve à 37°C, de 10 à 15 minutes selon la taille de l'embryon.
  13. à l'aide d'une pipette Pasteur, aspirer et rejeter plusieurs fois l'embryon qui se désagrège alors ; bien mélanger.
  14. centrifuger le tube 10 secondes à 1200 tours minute.
  15. jeter le surnageant.
  16. ajouter 1 ml de milieu de culture pour faire une suspension cellulaire.
  17. introduire stérilement dans le flacon de culture cellulaire 1 ml ou un peu plus de suspension cellulaire.
  18. placer le flacon bien horizontalement dans l'étuve à 37°C.

-Dans le fond de l'étuve sont placées :

On admet que lorsqu'elles s'éteignent, l'étuve contient suffisamment de CO2 pour la culture cellulaire (conseil donné par un laboratoire de recherches)

-Tous les 2 jours :

IV- Résultats au bout de 7 jours

Au-delà les cultures s'abîment. Aucune pollution, dans aucun flacon.
Présence dans les flacons de :

V- Remarques Aucune réticence de la part des élèves.
Séances qui ne sont pas de tout repos pour le professeur !
Très grande satisfaction au vu des résultats
Résultats assurés si l'on suit toutes les rubriques et tous les conseils
Elément variable constaté : durée de l'incubation nécessaire à l'étuve, de 3 à 5 jours

VI- Coût

Culture cellulaire que j'avais inscrite au projet d'établissement en 1997-1998 et également soumise aux instances rectorales en 1998-1999. Crédit accordé en juillet 1999.

MATÉRIEL FOURNISSEUR QUANTITÉ

PRIX UNITAIRE

PRIX

TOTAL

Milieu de culture L-15

(milieu de Leibovitz)

Société Gibco BRL

BP 96

95613 Pontoise Cedex

500 ml  

66,00 F
Sérum de veau Société Gibco 100 ml  

108,00 F
Pénicilline + streptomycine Société Gibco 10 000 UI ; 20 ml  

46,00 F
Solution de Tyrode Société Gibco 1 l  

18,00 F
L - glutamine Société Gibco 20 ml  

26,00 F
Trypsine EDTA Société Gibco 100 ml  

58,00 F
Insuline bovine Société Gibco 5 ml  

415,00 F

Milieu complet

SFRI4

Société Française de Recherche et d'Investissement

33127 St Jean d'Illac

500 ml

190,00 F
Charbon animal

Société Prolabo

12 rue Pelée, 75011 Paris

1 kg  

68,00 F
Paraffine Société Prolabo 1 kg  

64,00 F
Manche à dissection à mandrin

Fisher Scientific Osi

BP.2

78996 Elancourt Cedex

4 lots de 5

172,00 F

688,00 F
Aiguille droite Fisher Scientific Osi 2 lots de 10

85,00 F

170,00 F
Support pour tubes à hémolyse (24 cases) Fisher Scientific Osi 10

92,50 F

925,00 F
Ciseaux pointe fine Fisher Scientific Osi 4 lots de 5

80,00 F

320,00 F

Pipette sérologique Corning

Verre Pyrex stérile

Fisher Scientific Osi 1 lot de 180

456,00 F

456,00 F
Flacon Costar 3055

Société D. Dutscher

11 rue Christine de Suède

67110 Drumath

200  

625,00 F
Petite cuillère inox Gayet Lyon 4 lots de 6

70,00 F

280,00 F

Epingles entomologiques n°0

Réf. E.432-0

Auzoux

9 rue de l'Ecole de médecine, 75006 Paris

1 boîte de 100

43,00 F

43,00 F
Miniperceuse Castorama 1

600,00 F

600,00 F
total      

 

5166,00 F

VII- Illustrations

   
   
   

Contact :

Professeur Lafleur

Remerciements

Merci aux membres du laboratoire Biologie et Multimédia pour leur relecture et commentaires.