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LA MITOSE
Utilisation du DAPI

Le DAPI (Di Aminido Phenyl lndol) colorant utilisé en cytochimie et spécifique de l'ADN fluoresce en bleu.

Le DAPI (Di Aminido Phenyl lndol) se fixe spécifiquement sur l'ADN. Eclairé en lumière violette (max 372nm), il emet une fluorescence bleue (max 456nm).

Un fluorochrome est caractérisé par deux spectres : son spectre d'absorption (de la lumière incidente) et son spectre d'émission de fluorescence.

Comme on le voit, le DAPI absorbe les radiations violettes (max 372nm) et restitue une fluorescence bleue (max 456nm).

Le microscope doit être équipé d'un jeu de filtres correspondant aux caractéristiques du fluorochrome :

  • 1-un filtre d'excitation permettant la sélection des radiation absorbées par le fluorochrome (environ 380nm),
  • 2-un miroir dichroïque réfléchissant les radiations absorbables vers l'échantillon et ne laissant passer par transmission que les radiations bleues et au dessus (ici >400nm),
  • 3-un filtre d'émission ne laissant passer par transmission que les radiations bleues et au dessus (>400nm).

Optique simplifiée du microscope à fluorescence :

  • 1-lampe à arc
  • 2-filtre d'excitation
  • 3-miroir dichroïque
  • 4-objectif
  • 5-préparation
  • 6-filtre d'émission
  • 7-oculaire

Expérience : le DAPI est utilisé pour localiser l'ADN dans des cellules en culture (cellules PTK).

Observation témoin classique en lumière blanche.
Observation en utilisant le jeu de filtres spécifique de la rhodamine.
Observation en utilisant le jeu de fitres spécifique de la fluorescéine.

Résultat : l'ADN est, comme on s'en doutait, localisé essentiellement dans les noyaux (chromatine). Au cours de la mitose, on observe que l'ADN est essentiellement localisé dans les chromosomes. Le fuseau non marqué n'est pas visible.

Pour connaître les autres techniques :

Applications : les phases de la mitose :

Caroline Benlot, Nicole Blanchouin, Michel Delarue, Michèle Mosiniak, Roger Prat et Véronique Vonarx
Collaboration : Philippe Guillaud
 
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